主題:繁殖

+ 關注 ≡ 收起全部文章

第二節細菌的生長繁殖

第二節 細菌的生長繁殖

  生長繁殖的三大要素。掌握細菌生長繁殖的條件、影響因素及規律對臨床醫學及基礎研究均有重要意義。

  一、細菌生長繁殖的條件

  1.充足的營養:必須有充足的營養物質才能為細菌的新陳代謝及生長繁殖提供必需的原料和足夠的能量。

  2.適宜的溫度:細胞生長的溫度極限為-7℃~90℃。各類細菌對溫度的要求不同,可分為嗜冷菌(Psychrophiles),最適生長溫度為(10℃~20℃);嗜溫菌(Mesophiles),20℃~40℃;嗜熱菌(Thermophiles),在高至56℃~60℃生長最好。病原菌均為嗜溫菌,最適溫度為人體的體溫,即37℃,故實驗室一般采用37℃培養細菌。

  有些嗜溫菌低溫下也可生長繁殖,如5℃冰箱內,金黃色葡萄球菌緩慢生長釋放毒素,故食用過夜冰箱冷存食物,可致食物中毒。

  3.合適的酸堿度:在細菌的新陳代謝過程中,酶的活性在一定的PH范圍才能發揮。多數病原菌最適PH為中性或弱堿性(pH7.2~7.6)。人類血液、組織液PH為7.4,細菌極易生存。胃液偏酸,絕大從數細菌可被殺死。個別細菌在堿性條件下生長良好,如霍亂孤菌在PH8.4~9.2時生長最好;也有的細菌最適pH偏酸,如結核桿菌(pH6.5~6.8)、乳本鄉桿菌(pH5.5)。細菌代謝過程中分解糖產酸,PH下降,影響細菌生長,所以培養基中應加入緩沖劑,保持PH穩定。

  4.必要的氣體環境:氧的存大與否和生長有關,有些細菌僅能在有氧條件下生長;有的只能在無氧環境下生長;而大多數病原菌在有氧及無氧的條件下均能生存。一般細菌代謝中都需CO2,但大多數細菌自身代謝所產生的CO2即可滿足需要。有些細菌,如腦膜炎雙球菌在初次分離時需要較高濃度的CO2(5~10%),否則生長很差甚至不能生長。

  二、細菌生長繁殖的方式與速度

  細菌的生長繁殖包括菌體各組分有規律的增長及菌體數量的增加。

  細菌以簡單的二分裂方式無性繁殖,其突出的特點為繁殖速度極快。細菌分裂倍增的必須時間,稱為代時(Generation time),細菌的代時決定于細菌的種類又受環境條件的影響,細菌代時一般為20~30分鐘,個別菌較慢,如結核桿菌代時為18~20小時,梅素螺旋體為33個小時。

  (一)細菌個體的生長繁殖

  細菌一般以簡單的二分裂法進行無性繁殖,個別細菌如結核桿菌偶有分枝繁殖的方式。在適宜條件下,多數細菌繁殖速度極快,分裂一次需時僅20~30分鐘。球菌可從不同平面分裂,分裂后形成不同方式排列。桿菌則沿橫軸分裂。細菌分裂時,菌細胞首先增大,染色體復制。在革蘭氏陽性菌中,細菌染色體與中價體相連,當染色體復制時,中價體亦一分為二,各向兩端移動,分別拉著復制好的一根染色體移到細胞的側。接著細胞中部的細胞膜由外向內陷入,逐漸伸展,形成橫隔。同時細胞壁亦向內生長,成為兩個子代細胞的胞壁,最后由于肽聚糖水解酶的作用,使細胞壁肽聚糖的共價鍵斷裂,全裂成為兩個細胞。革蘭氏陰性菌無中介體,染色體直接連接在細胞膜上。復制產生的新染色體則附著在鄰近的一點上,在兩點之間形成新的細胞膜,將兩團染色體分離在兩側。最后細胞壁沿橫膈內陷,整個細胞分裂成兩個子代細胞。

  (二)細菌群體生長繁殖規律

  細菌繁殖速度之快是驚人的。大腸桿菌的代時為20分鐘,以此計算,在最佳條件下8小時后,1個細胞可繁殖到200萬上,10小時后可超過10億,24小時后,細菌繁殖的數量可龐大到難以計數據和程度。但實際上,由于細菌繁殖中營養物質的消耗,毒性產物的積聚及環境PH的改變,細菌絕不可能始終保持原速度無限增殖,經過一定時間后,細菌活躍增殖的速度逐漸減慢,死亡細菌逐增、活菌率逐減。

  將一定數的細菌接咱適當培養基后,研究細菌生長過程的規律,以培養時間為橫坐標,培養物中活菌數的對數以縱坐標,可得出一條生長曲線(圖3-1)。

圖3-1 細菌的生長曲線

  細菌群體的生長繁殖可分為四期:

  1.遲緩期(Lag phase):細菌接種至培養基后,對新環境有一個短暫適應過程(不適應者可因轉種而死亡)。此期曲線平坦穩定,因為細菌繁殖極少。遲緩期長短因素種、接種菌量、菌齡以及營養物質等不同而異,一般為1~4小時。此期中細菌體積增大,代謝活躍,為細菌的分裂增殖合成、儲備充足的酶、能量及中間代謝產物。

  2.對數期(Logarithmic phase):又稱指數期(Exponential phage)。此期生長曲線上活菌數直線上升。細菌以穩定的幾何級數極快增長,可持續幾小時至幾天不等(視培養條件及細菌代時而異)。此期細菌形態、染色、生物活性都很典型,對外界環境因素的作用敏感,因此研究細菌性狀以此期細菌最好。抗生素作用,對該時期的細菌效果最佳。

  3.穩定期(Stationary phase):該期的生長菌群總數處于平坦階段,但細菌群體活力變化較大。由于培養基中營養物質消耗、毒性產物(有機酸、H2O2等)積累PH下降等不利因素的影響,細菌繁殖速度漸趨下降,相對細菌死亡數開始逐漸增加,此期細菌增殖數與死亡數漸趨平衡。細菌形態、染色、生物活性可出現改變,并產生相應的代謝產物如外毒素、內毒素、抗生素、以及芽胞等。

  4.衰亡期(Decline phase):隨著穩定期發展,細菌繁殖越來越慢,死亡菌數明顯增多。活菌數與培養時間呈反比關系,此期細菌變長腫脹或畸形衰變,甚至菌體自溶,難以辯認其形。生理代謝活動趨于停滯。故陳舊培養物上難以鑒別細菌。

  體內及自然界細菌的生長繁殖受機體免疫因素和環境因素的多方面影響,不會出現象培養基中那樣典型的生長曲線。掌握細菌生長規律,可有目的地研究控制病原菌的生長,發現和培養對人類有用的細菌。

日期:2006年1月13日 - 來自[醫學微生物學]欄目

二、實驗動物繁殖生理數據

  二、實驗動物繁殖生理數據

表12-2 實驗動物繁殖生理數據(一)[3,54]

動物種類

性成熟年齡(生后)

繁殖適齡期(生后)

成熟時體重

性周期(天)

發情持續時間

小白鼠 ♀35~50天

  ♂45~60天

60~90天 20克以上 5(4~7) 12(8~20)小時
大白鼠 60天 80~110天 ♀250克以上

  ♂150克以上

4(4~5) 13.3(8~20) 小時
豚 鼠 ♀30~45天

  ♂70天

12~14周 500克以上 16.5(12~18) 6(1~18) 小時
小型:4個月

  小型:6個月

  小型:8個月

小:6個月

  中:8個月

  大:10個月

 

  2.5公斤以上

   
♀6個月

  ♂6~8個月

12個月 8~20公斤 180(126~240) 9(4~13)天
7~8個月 10~18個月 2~3公斤 15~28天 4(3~10)天
♀3.5年

  ♂4.5年

♀4.5年

  ♂5.5年

8公斤以上 28(23~33) 4~6天
綿 羊 7~8個月 8~10個月 ♀80公斤

  ♂75公斤

16(14~20) 1.5(1~3)天
山 羊 6個月 1~2年 ♀75公斤

  ♂45公斤

21(15~24) 2.5(2~3)天
4~6個月 4~6個月 1.5~3公斤    
鴿 6個月 6個月      
1~2年 3~5年   21  

表12-3 實驗動物繁殖生理數據(二)[3,54]

動物種類

發情性質

發情后排卵時間

妊娠期(天)

哺乳期(天)

產仔數(只)

壽命(年)

小白鼠 全年、多發性 2~3小時 19(18~24) 21 6(1~18) 2~3
大白鼠 全年、多發性 8~10小時 20(19~22) 21 8(1~12) 3~4
豚 鼠 全年、多發性 10小時 68(62~72) 21 3.5(1~6) 7
全年均有交配可能 交配后刺激排卵、交配后10.5小時 30(29~35) 45 6(1~10) 8
單發情、每年春秋2次 1~3天 60(58~63) 60 2~8 10
季節的多發性、每年2次 交配后24小時 63(60~68) 60 4 7~8
單發情11月~3月 月經開始后9~20天 164(149~180) 8個月 1 30
綿 羊 多發情,秋 12~18小時 150(140~160) 4個月 1~2  
山 羊 多發情,秋 9~19小時 151(140~160) 3個月 1~3  
蟾 蜍 4日~4周 每年2月下旬至3月上旬     5000個 10
青 蛙 排卵前數日間(交尾) 每年一次4~7月間     1000~4000個 10
日期:2006年1月13日 - 來自[醫用實驗動物學]欄目

四、裸鼠的繁殖和飼料條件

  四、裸鼠的繁殖和飼料條件

  (一)繁殖

  目前繁殖裸鼠不用nu/nu雌鼠,因其繁殖性能低,一般采用雜合子交配方式或隱性純合子雄性與雜合子雌鼠交配。這種交配方法,其后代將出現表現型正常的仔鼠和裸鼠,比例為1:1。

  繁殖時一般將nu基因導入C57BL/10小鼠中。在把基因導入同源(Cogenic)品系時,一般用雌性C57BL/10與雄性C57BL/10-nu(遠交株)雜交。其交配方法和結果如下:

  北京藥品檢定所繁殖裸鼠用的鼠種是BALB/C-nu/nu,系1973年從丹麥引入日本中央實驗動物所研究。繼續培育三年后,交由日本CLEA株式會社進行生產。1980年由CLEA引入。雄鼠是無胸腺裸鼠(BALB/C-nu/nu),雌鼠是有胸腺的雜合小鼠(BALB/C-nu/+)。采用BALB/C-nu/+♀與BALB/C-nu/nu♂隨機交配法進行繁殖,已取得較好成果,裸鼠的生產性能良好:受胎率達81.5%,平均產仔率8.1只/窩,平均產裸仔率3.99只/窩,窩平均仔鼠成活3.62只,9周齡仔鼠成活率100%,其主要項目數據與日本中央實驗動物研究所(CLEA)和英國實驗動物中心(LAC)發表的材料基本一致。

  (二)飼料條件

  因為裸鼠缺乏T細胞,易受細菌、病毒和霉菌感染的損害,如按常規動物方式飼養,只有少數裸鼠能生存一個月以上,最多不超過四個月,而放在隔離器(Isolator)中飼料的可存活一年以上。因此,裸鼠的壽命與飼料的衛生條件有密切的關系。一般是先在隔離器中繁殖。然后放入無特定病原體屏障環境中飼料。

  無病原體條件的飼料需要在動物和外界之間裝置一個屏障,屏障越嚴,飼料健康裸鼠就越有保證,然而,如不注意選擇屏障的類型,它的效果就沒有保證,故應持續檢查是否符合條件。

  1.無病原條件飼料裸鼠設備

  ⑴帶有密封空氣過濾裝置的塑料籠。每一籠自為一個單元。它包括一個標準的透明塑料籠,籠蓋上覆有空氣過濾材料。后者與籠子的貼近處用膠帶纏繞數周予以密封。然后,此籠可置于一般實驗室的標準籠架上。過濾材料呈片狀,由疏紡的(但非紡織的)聚酯纖維制成。它應該能夠防止微生物從籠外進入籠內。

  全套籠具皆經高壓蒸汽滅菌。使用它和喂養管理(如加飲水和飼料、清籠、斷奶等)時,都必須在一個防護罩內進行。罩內所含有的是正壓過濾空氣。而且還是層流(無湍流的)、單向的。

  上述的用具有操作方式是存養無致病原動物最簡單的方法。

  ⑵動物隔離器。最常使用的此種器具有系由柔軟片狀的透明聚乙烯基塑料制成,但也可用有機玻璃、不銹鋼、鋁皮和尼龍等材料來作。市售成品有一定規格,也可專門根據需要來設計大小,這是一個無菌的生活小室,可排除任何微生物。室氣進出該器都經過濾。全部食品和用品都經滅菌后,再經一個無菌的入口小室送入器內,可排除任何微生物。最初,選用化學滅菌劑和高壓蒸氣對該器進行滅菌處理。

  在無菌環境中,遺傳學背景相同的裸小鼠和通常的雜合子型小鼠壽命長短相近。但是,Poiley氏等(1974)發現,在這種環境中,新生小鼠的存活率,較之在普遍環境中的為低。為了使它們胃腸道的功能更接近于正常,有人提議給無菌環境中的裸鼠接種一次非致病的細菌(Poliey氏等,1974;Eaton等,1975)。這樣,常常可以起到改進生殖性能的作用,并有助于把無菌小鼠從隔離器中轉移到條件較差的存養設備中去。

  為了最有效的控制環境,從而得以盡力保存無菌的(或帶有一定菌群)裸體小鼠,隔離器是理想的存養設備。但它也有缺點,這就是費勞力,在一定空間中繁育動物的數量有限。

  ⑶空氣層流器。它包括標準的小室,覆罩和網架。每套器具形成一個獨立的環境,與室內通風系統無關。它自己輸入過濾空氣,把超凈空氣完滿地注入鼠籠,并以柱狀排出。由于每套器具互不相干,又有正壓空氣防護,所以可把它們放在通常條件下。它們是手提式的,既便于維修,又能最大限度地利用房舍和設備。

  使用此種方法是否成功,取決于管理工作的好壞。密切監視房室的污染和人員流動,只準專職人員入室。應當在正壓、單向氣流條件下料理維修鼠籠,接觸小鼠的一切物品(飼料和其它物品)都必須滅菌。飲水須經處理除去細菌,專職工作者須穿戴無菌的外科口罩、帽子、手套和后長衣,觸及動物時須用頭端包有橡皮的鑷子,而且必須經變性乙醇(就放在一邊)的浸洗。

  ⑷空氣層流室。有別于上述的一個房間內放置的小型空氣層流器,而是整個房間的環境都為正壓過濾空氣所籠罩。設計時,須裝置空氣進入的開關,空氣入口要裝指示器。工作人員在室內的穿戴同上所述。室內應用的飼料、墊料和籠具的滅菌,須用兩端有開關的高壓蒸氣滅菌器。

  引種方法可最大限度地利用房舍以繁育動物。雖然裝設此種房間的經費昂貴,但是,空氣層流室加上嚴格限制人員的出入,可保證生育期的裸體小鼠順利生產,它是大量繁殖裸小鼠的最好方式。舉例來說,由于采用它,近五年來(1973~1977),在Frederick癌癥研究中心平均每年生產裸體小鼠在20,000以上。

  2.環境控制

  ⑴溫度。適于裸體小鼠的室溫為26~28℃(78~820F),裸體小鼠無毛、其散失體溫較有毛小鼠為快。處于連續空氣層流中,它們的散熱更快,需要大約28℃(800F)的室溫予以補償。一般飼料室內溫度控制在25℃±1℃也可以。如果裸鼠和有毛雜合子鼠同籠飼養時室溫可略低一點。飼料在在連續空氣層流室中的裸鼠需要將層流室內溫度提高到28℃。

  ⑵濕度。相對溫度應保持在40~60%,此時,成年裸體小鼠皮膚水分散失最少。濕度過低,對新生裸鼠生存不利,這在空氣層流環境中尤為重要。

  ⑶通風。一般認為,每小時需要通風換氣10~15次,要用高效過濾器(99.9%)保證良好的空氣過濾,除盡空氣中大于0.3μm的顆粒。空氣出口也有過濾裝置(也可以用效能上較低的)以防止空氣倒流時的污染,而且要先設計好怎樣從室外維修這些過濾器。

  在空氣層流室內,空氣的正壓至少為0.65cmH2O。空氣的流向和速度要控制得均勻而自由。過濾的空氣連續掠過鼠籠時,奔流于動物環境之中,在理論是一個防止外源性污染的屏障。

  ⑷光照。每日應當維持10小時光照,14小時無光的明暗周期。不用窗戶,用人工照明,使全年光照恒定,但應避免過強的熒光燈光照。

  3.籠具和墊料

  培育裸體小鼠的籠具,籠底面積應當為97平方厘米(15平方吋),高度應為12.7厘米(5吋),應選可耐受高壓蒸氣滅菌的塑料或不銹鋼制作。其造型應當便于重疊,以利滅菌和存貯。透明塑料籠較好,用時不必打開籠蓋就要觀察動物。籠底要放墊料,不能用網。

  籠子必須每周清潔一次,或視需要處理,以保證環境清潔、干燥。用去污劑或其它洗滌劑清洗后的籠子或其它物品,必須充分沖洗干凈。否則,會刺激裸體小鼠的皮膚。

  墊料直接接觸裸體小鼠的皮膚,不能帶有刺激性。可選用不帶塵土和尖塊的硬木屑,研磨過的玉米桿,或用松木刨花。用前都要滅菌,且滅菌后不結成塊狀才可使用。

  為裸體小鼠建巢可用棉花或棉紙。但是,如果墊料有一吋厚,而且室溫控制得恰到好處,能使裸鼠感染舒適,一般就不需要墊棉花或棉紙了。

  4.供食和供水

  ⑴飼喂。裸體小鼠的營養需求與其它品系的小鼠相似。所以,任何市售飼料均可使用。食物必須滅菌,可將食物鋪成單層后放在小盤中或放在有孔的口袋中,進行高壓蒸氣滅菌(45分鐘,120℃)。滅菌前,不耐熱的營養素要加大用量(Williams氏等,1968)。另外,可補充全小麥面包和復制牛奶以改進生育能力,并防止同類噬食現象(Poiley氏等,1974)。

  ⑵飲水。有時,自來水中含有少量的各種非致病菌(包括銹色假單細胞菌)。為了避免經水源而污染裸體小鼠種群,有人建議將飲水過氯化達到12~15ppm;或用鹽酸酸化飲水,使之pH達到2.5~2.8,都可有效地控制其污染率,特別是假單細胞菌屬細菌的污染。如由于高壓滅菌而過多地損失維生素則可在飲水中加入復合維生素(例如,每1000ml加入1ml各種維生素),將該混合液通過直徑0.2μm微孔薄膜過濾除菌,每平方吋的壓力不得超過10磅。維生素混合液及水應適當地進行某些細菌培養的檢查,并應隔天更換水瓶,水瓶和飲水管在兩次使用之間必須洗滌和消毒。

  通過飲水供給抗菌素,可消除胃腸道的細菌(Van Der Waaij氏,1966)。并且,這也是一個防止裸體小鼠在嚴格的環境控制下可能發生的外源污染的附加措施。我們使用的四種配方如表4-4所示。下列抗菌素很少消化道吸收,每一種配方應每周更換一次,每四周輪換一遍,可減少抗藥菌株的出現。

  假如你一開始就在嚴格控制的環境中繁育無菌裸體小鼠,則也可以不必使用抗菌素,因為加用抗生素后在繁育技術上出現差錯的可能性也就增加了。

表4-4 裸體小鼠飲水中所用抗菌素的種類和用法

時  間(周)

抗  菌  素

用     量

1

桿菌肽 4克/升
新霉素 4克/升

2

抗敵素 250毫克/升
土霉素 500毫克/升

3

桿菌肽 1克/升
鏈霉素 1克/升

4

抗敵素 250毫克/升
土霉素 500毫克/升
氨芐表霉素 500毫克/升

  5.空氣層流室的保養

  層流室內從地面到天花板以及設備均需保持無塵和無破碎。每月必須檢測室內的無菌情況,每平方米放一個平皿,檢查室內空氣中的細菌數量。落下菌的檢查各國規定不同,見下表

表4-5 各國層流室落下菌限度的規定

規定單位

平甲培養基

暴露時間(分)

培養時間、溫度

落下菌限度

日   本

普通瓊脂

5′

37℃ 48hr

<5個

美   國

血 瓊 脂

10′

<3個

北京檢定所

血 瓊 脂

30′

<10個

  除落下菌數目不得超過限度外,并且不能有致病菌存在,否則,需要重新消毒。

  一切可移動的設備最好高壓滅菌,不可移動的裝置(如墻、地板、天花板等)要用液體酚類消毒劑徹底清潔,消毒應重復進行三次。消毒后房間應密封,48小時后作微生物學污染檢測,如檢測是陰性,才允許使用。工作人員入內必須穿戴全套滅菌外科手術衣和消毒的長靴。

  (三)裸鼠生產

  為了保證裸鼠具有相應品系的遺傳純度和嚴格的微生物控制要求,應根據裸鼠所具有特殊性,建立以下生產制度進行生產(見圖4-1)。

圖4-1 裸鼠生產制度

  1.核心群的動物(GF):按微生物學要求,應是經過無菌剖腹手術飼料在小型隔離器內的無菌動物。按遺傳學要求,一個隔離器內的動物應是相應的近交系,采用兄妹交配,一個隔離器是帶有nu純合基因的,采用回交和互交方法進行維持。

  2.擴大群動物(GB):按微生物學要求,應是來自核心群的無菌的幼小裸鼠和雜合鼠,放入大隔離器內或水平層流的小隔離房內,并對這些幼鼠導入復合的正常腸內菌叢,使之變成悉生動物。按遺傳學要求,應保持nu等位基因的純合子和雜合子進行生產。

  3.生產群動物的種子群,應來自擴大群的動物,飼料在屏障系統內,一個生產周期為6~20個月。

  試驗期裸鼠也應以裸鼠的免疫功能缺陷特性,按以下體系進行試驗與飼料(見圖4-2)。

  ⑴裸鼠移植癌建立和檢疫。

  ⑵腫瘤維持。

  ⑶大量移植。

圖4-2 維持腫瘤預防感染體系

  總之,應按生產裸鼠所有的要求進行,否則試驗不易獲得成功。

  飼料繁殖裸鼠必須注意的問題:

  ⑴建立屏障系統是飼料繁殖裸鼠的重要條件。裸鼠先天性胸腺缺失,免疫系統不健全,缺乏對付外來因子的抵抗力,對病原體極易感染,在常規環境中,最多只能生存數月,因此,必須要在無病原隔離飼料環境中飼料。根據我國目前實際情況,尚不能新建更多的高標準的動物實驗設施,而改造現有建筑的辦法是可行的。改建后的屏障飼養室雖與科技發達國家相比是比較簡陋的,但基本上達到了屏障系統設施的要求,費用大為降低,也可使裸鼠繁殖工作正常進行。

  ⑵裸鼠繁殖方法最好選用純合子隱性(nu/nu)雄鼠與雜合子(nu/+)雌鼠進行交配生產。因為純合子隱性雄鼠一般能正常生育,其仔代裸鼠和正常仔鼠的比例為1:1;所有正常的仔鼠都是雜合子,當用這些小鼠作實驗對照時,就可明顯地觀察到純合子與雜合子之間的不同差異。裸鼠繁殖的其它二種方法,均存在一定缺點,如采用雜合子(nu/+)雌雄鼠交配時,其子代中裸鼠與表現型正常的仔鼠的比例為1:3,所繁殖的裸鼠少,而且繁殖的正常小鼠可能是nu/+或+/+兩種基因的小鼠,除非通過育種,否則不易區別。又如采用純合子隱性(nu/nu)雄鼠和雌鼠交配繁殖,雖然所有的子代都是裸鼠,但這種繁育方法不很有效,因為雌裸鼠繁殖力低,同時護理也很困難。

  ⑶仔鼠出生后存活與否,關鍵在于哺乳,如不注意哺乳則哺乳期裸鼠死亡率很高。主要原因在于同窩哺乳的有雜毛純合仔鼠發育快,體大健壯,競爭力強,與純合裸鼠爭食母乳而影響純合裸鼠的發育,以致其消瘦死亡。為了提高裸鼠生長發育速度及存活率,采用純合裸鼠,雜合仔鼠分別哺乳,并對雌鼠加喂高蛋白、高維生素飼料。

  ⑷為了保持較長期的正常繁殖生長,就必須建立微生物監測方法來控制質量。因裸鼠免疫機能的缺陷,易受微生物、病毒和寄生蟲感染,特別是易受小鼠肝炎病毒的感染,一但裸鼠感染上小鼠肝炎,同窩裸鼠會于生后36~134天相繼死亡,無一幸免。病鼠肝發生大理石樣變化,質較硬,呈黃色、粗造、結節樣、邊緣不齊。對裸鼠的飼料繁殖威脅很大。在裸鼠的飼料中,常易發生所謂“消耗性綜合征”(Wasting syndrome)實與裸鼠常見病之一的鼠病毒性肝炎感染有密切關系,用剖腹產可避免此病毒感染。

  采用微生物的檢查方法時,要考慮裸鼠的生理特性,裸鼠屬于免疫機能缺陷的動物,鼠肝炎病毒、仙臺病毒等感染后,血清中不產生抗體。因此,只能檢查同胎雜合仔鼠血清中的抗體情況,或直接分離病原體,或將裸鼠的肝組織接種于雜合仔鼠后,再用血清學方法測定其相應抗體。因此,對裸鼠一些致病性的病毒和臺澤氏病原體等的檢查方法,主要是檢查同胎雜合鼠血清中抗體的產生情況,來判斷裸鼠是否被這些病原體所感染。

日期:2006年1月13日 - 來自[醫用實驗動物學]欄目

三、培育方法

   三、培育方法

  培育近品系的重要手段,一是交配繁殖,二是人工選擇,兩者經常是同時進行的。交配繁殖的目的在于使存在于基代雙親(即用于培育近交系的最初一對小鼠)中的不同遺傳位點的不同基因通過連續許多代的重新組合達到純合的程度,并保持足夠數量的后裔可供交配時選擇。人工選擇的目的是挑選符合培養需要(有繁殖能力或其它的特殊性狀)和淘汰不需要的個體。

  (一)近交的交配方式

  開始培育近交系種群和引起的近交系原種的維持,一般采用以下三種方法:

  1.單線法:從近交系原種選出3~5個兄妹對進行兄妹交配,從中選出生產能力最好的一對進行繁殖,然后從中選擇一對作為下一代生產的雙親,如此一代代的延續下去。這個方法生產的個體比較均一,但選擇的范圍太小,由于只有單線的仔代,易發生斷代危險。

  2.平行法:選3~5對兄妹對,每個兄妹對都選留下一代種鼠,一代代的延續下去,這個方法生產的個體不太均一,但選擇范圍大,易發生分化。

  3.選優法:這個方法保留了上述兩個方法的優點克服了兩個方法中的缺點,是個較好的保種方法。假定每代選6對,每對都選自同一雙親的仔代同胞兄妹,在繁殖過程中,每一代均保持6對,當某對出現不孕或生產能力降低,而不適于繼續繁殖時,則可從另一對所生的后代中選擇優良者加以代替。近交系原種動物的維持方法見圖3-2。

圖3-2近交系原種群(基礎群)的維持方法

  (二)交配繁殖

  1.近交系的培育要在專用固定的飼養室內進行。為了避免別的鼠系的進入和防止可能發生的感染,應有嚴密的隔離設備和措施。如墻壁門窗都不能有縫道,飼養罐蓋子要十分嚴密,不能讓任何小鼠隨便進入。外觀相似種系不同的動物應分室飼養。工作人員進入飼養室時需帶口罩,非飼養人員不能隨便進入。飼養罐、飲器、食具等使用前都要滅菌消毒等。

  2.應該嚴格遵照單對配對,父母同罐的要求。這樣便于隨時檢查和發現問題。而且雄鼠不離開雌鼠可以減少搞錯譜系的危險,雄鼠也不干擾幼鼠的哺育和成長。一般不應采取一雄二雌的交配飼養方式,因為兩個雌鼠可能同時懷孕,有時難于辨認年齡相仿的仔鼠與母鼠的關系。

  3.對同系的每個鼠都應有詳細明確的譜系和戶籍記錄:包括飼養罐號,同對的雌雄鼠號碼(可根據父母鼠號碼、胎數、同胎中第幾號等確定)、培育代數、生育日期、胎數、產雌雄仔鼠數、斷乳后存活的雌雄仔鼠數,選作傳代交配的仔鼠號等等。記錄不全或戶籍登記錯誤往往會造成無法挽救的損失,特別是當這個錯誤未被及時發覺時。如果對一個動物譜系身份有懷疑,應立即予以丟棄。另外,所有飼養罐也要加貼有明確記錄的標簽并隨時進行檢查,發現任何情況都就立即記入戶籍記錄。

  4.選用第一、二胎同胎仔鼠作b×s交配比b×o交配更易處理,而且常常繁殖的更好。如有必要也可用同父母不同胎的仔鼠配對。譬如在一胎仔鼠的性別完全或大部分相同的時候,經過很多代的近交繁殖以后,有時也可以用親緣關系較遠的堂(表)兄妹進行交配。當然這時近交系數要退回到它們的共同祖先(對堂兄妹交配來說是退回到祖代)這一代的F值。但如這種做法只是為了想提高繁殖較差的生育率,那么倒不如停止這條線的繁殖,另找一個生育較高的亞系作為近交繁殖的新起點更為妥善,因為前面的做法即使能夠培育出一個近交系來,它的后裔也往往難以提供足夠的實驗動物數量。

  5.在近交系培育過程中,為了保證對生育力有一定的選擇范圍(生育力的選擇常常需要挑選多產和斷乳后存活的仔鼠較多的亞系進行交配繁殖),每一代都應保留一定數目(3~4個)的亞系,以后隨著代數的增加,除留下最后2~3代分出的亞系外,其余可陸續淘汰或拋棄,直到最后留下一個可追溯到基代的品系。因此除了記錄下譜系和戶籍之外,常常還需要隨時繪制象下面的那些譜系圖,如圖3-3,以便分清或隨時終止某些亞系。

圖3-3 近交系培育過程中動物的譜系圖

  提供交配繁殖的亞系選擇應特別注意:

  (1)這個亞系應具有培育所需要的性狀。

  (2)至少與準備終斷的亞系有差不多的生育率和生活力。在繁殖良好的種系中一般在第3~4代以后就可終斷其它的亞系而只留一個亞系。如果子裔不太多,至少需傳5~6代甚至10代以后才能這樣作。

  6.在完成20代b×s交配繁殖而建成一個近交系之后,要繁殖足夠的動物提供實驗需要,同時又不放棄選擇最適合的動物進行繁殖并盡可能的保持遺傳的一致性,最好的作法是從近交系中取出幾對較好的動物繼續照上面的辦法進行b×s交配傳代,并保持譜系和戶籍記錄,同時把其余的動物另室飼養,讓最后三代任意交配,加速繁殖。可以每罐放1雄4雌,待受孕后取出母鼠,用它們的后代提供實驗需要。開始時,應注意多保留雌鼠。

日期:2006年1月13日 - 來自[醫用實驗動物學]欄目

育   ①動物生育,繁殖。《素問·五常政大論》:“歲有胎孕不育。”   ②植物生長。《素問·五常政大論》:“氣布而蕃育。”
日期:2006年1月12日 - 來自[字母Y]欄目

基因工程繁殖出瘦體老鼠有助解決人肥胖問題

2005年11月14日 (雅虎科學) 10 據美聯社報道,加拿大的科學家最近通過改變基因的方法,在實驗室中繁殖出了瘦體的老鼠,這一發現為解決社會中日漸普遍的肥胖癥難題提供了基礎。
渥太華健康研究院的研究人員把老鼠體內的一種基因去除后,讓老鼠重新繁殖新的老鼠,研究人員發現,這些基因改變的老鼠體內的脂肪只有正常老鼠的一半,而且老鼠體內脂肪還不是能夠使體重增加的那種脂肪。渥太華大學的分子生物學教授表示,實驗室繁殖出來的瘦體老鼠體內的褐色脂肪細胞的比例相當的高,這種褐色脂肪細胞具有消耗脂肪,將其轉化為熱量的能力。
正常的老鼠體內大多都室白色脂肪細胞,這些白色脂肪細胞在新陳代謝中把脂肪轉化為能量,以滿足肌肉組織和其他身體機能的需要,因此當攝入的食物所含的能量過多時,這些白色脂肪細胞就會成倍增長,同時單個細胞也會變大,最終導致老鼠變得越來越胖。對人類和許多的哺乳動物來說,體內脂肪細胞的情況也大抵如此。
這些實驗室繁殖的瘦體老鼠的體內,科學家去除了一種稱為P107的基因,這種基因具有細胞前體生成轉換器的作用,去除這種基因后,老鼠體內就生成了消耗熱量的褐色脂肪細胞,代替了儲存熱量的白色脂肪細胞。老鼠被去除P107基因后,盡管吃的食物和正常老鼠一樣多,但是它們體內的褐色脂肪細胞消耗掉了多余的熱量,所以依然能保持纖瘦的體形。
日期:2005年11月17日 - 來自[遺傳與基因組]欄目

全球變暖加速老鼠繁殖 黑死病災難可能再襲歐洲

2005年11月17日 (雅虎科學) 6 據俄羅斯媒體報道,醫學專家日前警告稱,曾經在14世紀奪去3400萬人生命的黑死病可能會重新襲卷歐洲大陸。
日前在挪威首都召開了國際黑死病和擴散問題座談會。與會代表指出,全球氣候變化使歐洲大陸氣候變得更加炎熱和潮濕,這給老鼠以及其身上攜帶的蚤繁殖創造了適宜條件,因此黑死病可能會重新回到歐洲。
來自歐洲四個國家和哈薩克斯坦的研究人員小組日前完成了多年來一直在進行的評估,他們對戰后前蘇聯專家在哈薩克斯坦搜集的大量資料進行研究評估。從1949年開始,這里就設立了20個嚙齒動物觀察站,每個觀察站有200名工作人員,他們負責經常從老鼠身上采集血液和身體組織樣本。一旦哪里出現黑死病跡象,工作人員就會立即采取消毒和預防措施。但隨著前蘇聯的解體,上述觀察站都被撤銷,并已經解散,只留下一些資料。
據悉,在哈薩克斯坦草原上半個世紀內所搜集的觀測資料證實,溫暖的氣候與黑死病的再現是有著直接聯系的。科學家早就討論過這一問題,但在溫暖氣候條件下感染的老鼠數量是會增加還是減少在此之前還不得而知。目前可以肯定的是,溫室效應將使老鼠加速繁殖,這種可怕疾病出現的可能性也在進一步變大。據悉,14世紀中葉暴發的黑死病也正好發生在炎熱和潮濕條件下。
黑死病于1347年出現在西西里,此后3年內橫掃歐洲,長驅直入北歐,甚至可能到達了冰島和格陵蘭。沒有人知道這場瘟疫到底殺死了多少人,后世的學者通過不同的方法估算出,歐洲當時的人口約減少了25%到75%。挪威奧斯陸大學的一位歷史學家說,1347年歐洲有8000萬人,6年后變成了3000萬。此后300年間,黑死病還曾多次暴發,可能總共殺死了多達2億人,直到1670年以后它神秘消失了。
1894年,法國細菌學家亞歷山大·耶爾森發現了引起鼠疫的病原體,命名為耶爾森氏鼠疫桿菌。從那以后,科學界普遍認為,黑死病就是鼠疫桿菌襲擊淋巴腺導致的腺鼠疫。它可以由人直接傳染給人,但主要傳播途徑是老鼠和跳蚤。
黑死病的一種癥狀,就是患者的皮膚上會出許多黑斑,所以這種特殊的瘟疫被人們叫做“黑死病”。對于那些感染上該病的患者來說,痛苦地死去幾乎是無法避免的,沒有任何治愈的可能。
日期:2005年11月17日 - 來自[健康快訊]欄目
共 20 頁,當前第 17 頁 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 :


關閉

網站地圖 | RSS訂閱 | 圖文 | 版權說明 | 友情鏈接
Copyright © 2008 21tcm.com All rights reserved. 醫源世界 版權所有 蘇ICP備12067730號-1
醫源世界所刊載之內容一般僅用于教育目的。您從醫源世界獲取的信息不得直接用于診斷、治療疾病或應對您的健康問題。如果您懷疑自己有健康問題,請直接咨詢您的保健醫生。醫源世界、作者、編輯都將不負任何責任和義務。
本站內容來源于網絡,轉載僅為傳播信息促進醫藥行業發展,如果我們的行為侵犯了您的權益,請及時與我們聯系我們將在收到通知后妥善處理該部分內容
聯系Email: